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急性经皮毒性试验
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  • 2021-09-07
  • 来源:中科检测
  • 急性经皮毒性试验急性经皮毒性检测急性经皮毒性检验

  范围

 
  GB/T 15670的本部分规定了急性经皮毒性试验的基本原则、方法和要求。本部分适用于为农药登记而进行的急性经皮毒性试验。
 

  规范性引用文件

 
  下列文件对于本文件的应用是必备的。只要注日期的引用文件,仅注日期的版本就适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
 

  GB 14925 实验动物 环境及设施

 
  农药登记资料规定(中华人民共和国农业部令[2007]第10号)
 

  术语和定义

 
  1、急性经皮毒性(acute dermal toxicity)
 
  经皮肤染毒受试物连续接触24小时所产生的健康损害效应。
 
  2、剂量(dose)
 
  所给受试物的量,以实验动物单位体重所接受受试物的质量表示(mg/kg 体重)。
 
  3、半数致死剂量(median lethal dose)
 
  一次或在24小时内多次给予实验动物受试物后,引起实验动物总体中半数死亡的毒物统计学剂量。用实验动物单位体重接受受试物的质量表示(mg/kg体重)。
 
  4、剂量-反应关系(dose-response relationship)
 
  剂量与特定效应的发生率间的关系。
 

  试验目的

 
  通过24小时内连续经完整皮肤染毒受试物,观察受试物对实验动物所产生的毒性作用,初步了解受试物能否经皮肤吸收和毒作用模式,为急性毒性分级、标签管理及其他毒理学试验剂量的选择提供依据。
 

  试验概述

 
  实验动物受试部位的被毛要在试验前去除,把实验动物分成若干剂量组(至少3个组),每组涂布不同剂量的受试物﹐然后观察实验动物中毒反应和死亡情况,对试验中死亡和试验结束时处死的动物应做大体解剖,计算LD和95%可信区间。

 
急性经皮毒性试验
 

  试验方法

 

  1、受试物配制

 
  液态受试物一般使用原液。固体受试物应将其研磨成粉状过100目筛,并用水或其他无毒、无刺激性、不影响皮肤通透性,也不与受试物反应的介质充分湿润,来确保受试物和皮肤达到良好的接触。
 

  2、实验动物

 
  2.1、种属和体重
 
  首选大鼠,也可选白色家兔、白色豚鼠或非啮齿类动物。选用大鼠以外的臭他实验动物应说明理由。实验动物体重要求范围分别为:大鼠200 g 300 g.白色家兔2.0 kg~3,0 kg豚鼠350 g~450 g。可选国内常用品系。雌性动物应为未妊娠和未经产的。
 
  2.2、动物性别
 
  选择最敏感的性别动物进行试验。不能确定时,可提供两种性别动物的试验结果;或先进行一种性别动物的试验后,再至少选择另外一种性别的5只动物在相同剂量下染毒,评估最敏感性别的动物。如果有足够的证据表明所试验的动物性别肯定是最敏感的,可不必再进行第二种性别的染毒试验。
 
  2.3、饲养环境
 
  正式试验前,动物应在试验环境中检疫、适应3d~5d时间。
 
  实验动物饲养环境条件应符合GB 14925的有关规定。试验期间,为避免实验动物相互抓挠、舔食,推荐采用单卷饲养。
 

  3、剂量和分组

 
  3.1、剂量
 
  通过每剂量一只动物的预试验确定剂量范围。剂量设计可采用霍恩氏法,概率单位法等。至少应设3个剂量组,组间距应根据受试物毒作用特征决定,但应能保证动物出现一定梯度的毒性作用和死亡率,以满足计算半数致死剂量的需要。
 
  3.2、限量试验
 
  一般情况下﹐使用啮齿类动物时,一次染毒两种性别各5只动物,2 000 mg/kg体重,或根据管理上的需要也可选择5 000 mg/kg 体重剂量进行试验。特殊情况下,限量试验可采用更高的剂量。如果没有死亡发生,可结束试验,不需要做多组试验。如果出现与染毒有关的死亡,需要进行多个剂量的试验。
 
  3.3、动物分组
 
  实验动物随机分组,大鼠或豚鼠每一剂量组(单性别)大于等于5只;家兔每一剂量组(单性别)大于等于4 只。
 

  4、试验步骤

 
  4.1、备皮
 
  试验前24小时,在动物背部正中线两侧去毛,仔细检查皮肤,要求完好无损,防止改变皮肤的通透性。染毒面积不应少于实验动物体表面积的10%。应通过对动物体重的测定确定染毒部位的面积。
 
  4.2、动物的固定
 
  染毒时应采用必要的措施对动物进行适当固定,并需要一定程度的松动,不推荐完全限制动物活动的方法。
 
  4.3、染毒操作
 
  将受试物均匀涂布于实验动物的去毛区,面积略小于去毛区,记录染毒面积。覆盖一层不渗透材料后再以2层~8层的多孔够布覆盖,并用无刺激性胶布或者绷带加以固定,保证到受试物与皮肤密切接触,防止受试物挥发、脱落和被动物舔食。接触24 h后取下固定物和覆盖物,用毫水或适当的方法清除皮肤上残留的曼试物。在保证受试物与皮肤充分接触的条件下,对毒性较大的受试物,可根据剂量相对减小染毒区域的面积。
 

  5、试验观察和检查

 
  5.1、观寰期限
 
  每天观察一次,连续14d记录史毒发生)发展过程,死选情况.观察期限也不是团定的,根据毒性反应,反应出现和消失的时间可做出调鉴.如果动物中毒反应、死豢时间延迟(染毒后4 d后才显示),观察期限应适当延长,最长不超过21d。
 
  5.2、观察内容
 
  5.2.1临床观察
 
  观察至少包括皮肤.被毛、眼﹑黏膜的改变和呼吸系统,神经系统﹑肢体活动.行为方式等变化发生的时间﹑程度和持续时间观察的内容包括:
 
  a)中枢神经系统和神经肌肉系统.体位异常、叫声异常、不安采滞,震颤、抽搐、麻痹、运动失调、对外反应过敏或迟钝,是常行为如过度反复抓挠口周、梳理搂圈,甚至自残﹑倒退行走等;
 
  b)植物神经系统:瞳孔扩大或缩小流涎或流泪;
 
  c)呼吸系统:鼻孔流液﹑鼻棚、鼻翼扇动,呼吸深缓、呼吸过速、蜂腰:d)泌尿生殖系统:会阴部污秽、有分泌物、阴道肿胀;
 
  d)泌尿生殖系统:会阴部污秽、有分泌物、阴道肿胀;
 
  e)皮肤和被毛:皮肤充血、紫绀.被毛蓬松或潮湿、污秽;
 
  f)眼:眼球突出﹑结膜充血﹑溢血性分泌物﹑角膜混浊;
 
  g)消化系统:腹泻、厌食。
 
  应特别注意染毒区皮肤的反应。如发现动物死亡或处于体弱、濒死状态,应及时与其他动物分离,并记录发生的时间,称量体重,解剖检查,以减少动物同类互残及死后组织自溶,避免动物信息的丢失。如果死亡动物不能立即进行大体解剖检查,应保存在能够减少自溶的低温环境中(冷藏,不能冷冻),并在24h内进行解剖检查。
 
  5.2.2、体重称量
 
  应分别在染毒前、染毒后(至少每周一次)和处死前称量并记录动物体重。
 
  5.3、病理学检查
 
  在试验期内中毒死亡的和人道处死的动物应做大体解剖,记录每只动物的大体病理改变。染毒后存活时间大于等于24 h的动物其器官显示有大体病理改变﹐则需进行组织病理学检查,以便获取有关毒作用的信息。必要时对染毒区和临近非染毒区皮肤作组织学检查。
 

  试验结果和评价

 

  1、结果处理

 
  1.1、妳用表格列出试验中获得的各组(两种性别或单性别)动物的全部原始数据,内容应包括:动物编号,性别、染毒剂量、体重,各种体征的有无及程度、死亡或存活状况,大体解剖及组织病理学检查时各病变的有无及程度。
 
  1.2、分别统计各组及不同性别动物的数量,体征发生、死亡、存活及大体解剖和组织病理学检查的各类病变发生的频数﹐计算不同组、不同性别动物上述各项的发生率及不同时间的体重均值。
 
  1.3、用适宜的统计学方法对上述数据进行统计学分析。
 
  1.4、用适宜方法计算LDs值和95%可信区间。
 

  2、结果评价

 
  2.1、对受试物能否经皮吸收及毒作用特点做出初步评价。
 
  2.2、受试物的毒作用水平,如能得到剂量-反应关系曲线,可对急性经皮毒作用阈值做出初步评价。
 
  2.3、明确是以何种性别的动物和接触时间得到的毒性参数。
 
  2.4、急性经皮毒性级别按照《农药登记资料规定》中 3.3.2.8的相应标准判定。
 

  试验报告

 
  试验报告至少应包括以下内容:
 
  a)试验名称、试验单位名称与联系方式,报告编号;
 
  b)试验委托单位名称和联系方式,样品受理日期和封样情况;
 
  c)试验开始和结束日期、试验项目负责人、试验单位技术负责人,签发日期;d)试验摘要;
 
  e)受试物名称、有效成分美国化学文摘登录号(CAS号)(如已知),代码(如有)、纯度(或含量)、剂型、生产日期(批号)、理化性质、配制所用溶剂和方法;
 
  f)实验动物种属、品系、级别﹑数量、体重、性别、来源(供应商名称﹑实验动物质量合格证号、实验动物生产许可证号) ,检疫、适应情况,实验动物饲养环境,包括温度﹑相对湿度﹑饲料,单笼饲养或群饲、实验动物设施使用许可证号;
 
  g)剂量和组别,包括选择剂量的原则或依据、剂量和组别,动物分组方式和每组每种性别动物数;
 
  h)试验条件和方法,包括主要仪器设备,染毒途径,染毒方案、试验周期﹑观察指标等;
 
  i)试验结果:以文字描述和表格逐项进行汇总,包括临床中毒表现,中毒表现出现、持续和恢复时间,染毒后出现死亡的时间,体重变化,与剂量的相关性以及大体解剖和组织病理学改变等,指出结果的统计处理方法;
 
  j)试验结论;给出明确结论,如LD。,95%可信区间和毒性分级,必要时对有关问题进行讨论;
 
  k)原始记录保存情况的说明。
 
  中科检测是中科院旗下独立第三方检测机构,具有专业检验检测、业务对接以及技术支持团队,具备开展急性经皮毒性试验的技术服务能力,具有一流的专业水平和严谨的工作作风,为客户提供专业、高效、优质、全面的服务。

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