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染色体畸变试验的方法
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  • 2021-09-10
  • 来源:中科检测
  • 染色体畸变试验染色体畸变检测染色体畸变试验方法
  染色体畸变是基因突变的一种形式,通常后果比较严重。可用外周血淋巴细胞,或人和哺乳动物体细胞系作为材料进行检测,常用的体细胞系有中国地鼠卵巢细胞(CHO),中国地鼠肺成纤维细胞(V79和CHL),人胚肺2倍体成纤维细胞等。

 
染色体畸变试验

 

  一、染色体畸变试验原理

 
  外周血中小淋巴细胞几乎都处在细胞增殖周期的G。期或G。期(不同于体外培养的体细胞)。一般条件下是不会再分裂的。当在培养物中加入适量的植物血凝素(phytohernagglu—tinin,PHA),37℃培养52~72h后,淋巴细胞开始转化,进入细胞增殖周期,此时可获得大量的有丝分裂细胞。再经过秋水仙素处理,低渗、固定,即可在显微镜下观察到良好的中期染色体分裂象。电离辐射,化学有害物质作用于机体或体外细胞,均可引起细胞染色体的损伤,且损伤与剂量(浓度)呈良好的线性关系。
 

  二、材料与方法

 

  (一)染色体畸变试验材料

 
  1.受试材料:外周血淋巴细胞。
 
  2.RPMI 1640培养液,含20%小牛血清。
 
  3.肝素:用生理盐水配成500U/ml,4℃冰箱内保存备用。
 
  4.秋水仙素:用0.85%生理盐水配成40μg/ml浓度,过滤后4℃冰箱保存。
 
  5.促细胞分裂剂:植物血凝素(PHA)。
 
  6.KCl低渗液:配制75mmol/L KCl水溶液。
 
  7.固定液(甲醇:冰醋酸=3:1)。
 

  (二)染色体畸变试验方法

 
  1.受试物的处理实验分组,至少设立五个组,即阳性对照、阴性(溶剂)对照及三个剂量组。zui高剂量和zui低剂量之间相差10倍,中间再设一个剂量,阳性对照物为已知的染色体断裂剂,如C(mitomycin c,MMC),剂量为o.02μg/ml;黄曲霉素毒素Bl,浓度为10-6 M等。每组中应设2~3个平行样品。
 
  2.外周血淋巴细胞培养常规培养。
 
  3.收集细胞经受试验处理的细胞,培养开始后52~72h收集细胞。依不同受试物收集时问有所差异。
 
  4.加入秋水仙素培养终止前4h于培养物中加入40μg/ml秋水仙素,终浓度为0.4~0.8μg/ml,37℃培养。
 
  5.制片。
 
  6.染色用(}iem∞染液染色15min,用自来水轻轻冲洗残留染液,待干。
 
  7.镜检先在低倍镜下寻找分散良好的分裂象细胞,然后用高倍镜观察,进行染色体畸变计数,分析,分别记录染色体畸变细胞数及各种类型染色体畸变细胞数,选择良好的典型的染色体畸变图进行显微照相。
 

  三、结果分析

 
  1.染色体总畸变率及畸变率
 
  总畸变率(%)=各种畸变类型数/分析细胞总数×100
 
  畸变率(%)=染色体畸变数/染色体总数×100
 
  2.畸变类型分析包括断片(F)、双着丝粒(D)、环(R)、互换(E)等,电离辐射常见断片、双着丝粒、环等,而化学毒物常见单体断裂。
 
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