分枝杆菌属于高抗力微生物，对常规消毒手段耐受性较强，是医院、疾控、内镜诊疗、公共卫生场景消毒质量管控的重要指示菌。消毒产品若宣称具备杀灭分枝杆菌的能力，必须依据行业标准完成全套消毒效果评价检测，检测结果直接关系产品备案、上市使用以及临床环境感染风险防控。2026年12月1日正式实施的WS/T10054‑2026《分枝杆菌消毒效果评价方法》替代旧版WS/T327‑2011，更新了试验条件、试验类型与判定要求，是当前消毒剂、化学因子类消毒器械开展分枝杆菌消毒效果验证的核心执行依据。

　　一、标准适用范围与主要修订要点

　　WS/T10054‑2026适用于消毒剂及产生化学消毒因子的消毒器械对分枝杆菌的消毒效果评价。本次修订对比旧版标准，在框架和技术细节上做了多处重要调整，新增基本要求章节，扩充载体可选材质，增加物体表面模拟现场消毒试验项目，更新培养基配方与制备工艺，优化评价规定，进一步贴合国内消毒产品实际应用场景，让实验室检测结果更贴近真实使用条件。

　　标准明确试验操作环境需要满足生物安全Ⅱ级（BSL‑2）实验室条件，所有菌株、染菌载体相关操作应在Ⅱ级生物安全柜内开展，做好人员防护与菌株废弃物处置，防范生物安全风险。试验指示菌株统一采用龟分枝杆菌脓肿亚种CMCC(B)93326或ATCC19977。

　　二、三大核心试验方法选择与操作要点

　　标准将试验划分为实验室试验、模拟现场试验两大类，根据消毒剂形态、使用方式选用对应检测方法。

　　1.悬液定量杀灭试验

　　该方法适用于可稀释的化学消毒剂。试验体系会添加有机干扰物，清洁类消毒对象采用0.3%牛血清白蛋白，脏污未清洗对象采用3.0%牛血清白蛋白。按照产品说明书最低浓度，设置最短作用时间、0.5倍最短时间、1.5倍最短时间三个作用时长，试验温度控制20℃±1℃，作用结束后加入合格中和剂终止消毒作用，开展活菌计数，整套试验需要重复3次。悬液试验回收菌量应控制在1×10⁶CFU/mL～5×10⁶CFU/mL区间。

　　2.载体浸泡定量杀灭试验

　　针对黏稠消毒剂、冲洗类消毒剂、原液使用消毒剂，以及化学因子类消毒器械，优先选用载体浸泡定量杀灭试验。载体材质可匹配实际消毒对象，包含不锈钢、玻璃、棉布、聚四氟乙烯、滤纸等，载体需要提前脱脂灭菌，滴染制备染菌载体，单片载体回收菌量要求1×10⁶CFU/片～5×10⁶CFU/片。染菌载体完全浸没于消毒剂溶液，到达设定时间后转移至中和剂试管振荡洗脱，再进行活菌培养计数，同样需要开展3次重复试验。

　　3.物体表面模拟现场消毒试验

　　为本次标准新增项目，用于模拟实际物体表面消毒工况。在密闭空间内放置不少于10片染菌载体，均匀布点包含难消毒位置，按照产品说明书的浓度、程序开展消毒处理，回收载体进行洗脱计数。内镜相关产品的模拟现场消毒，则直接执行GB/T38497内镜消毒效果评价方法。

　　三、中和剂鉴定试验前置要求

　　在正式开展杀灭试验之前，必须完成中和剂鉴定试验，验证中和剂能够有效中和残留消毒剂，同时不会抑制试验菌株生长。鉴定分为悬液定量鉴定、载体定量鉴定两套流程，载体鉴定结果不能直接用于悬液试验。

　　试验设置四组对照：中和剂+菌悬液组、（消毒剂+中和剂）+菌悬液组、稀释液+菌悬液阳性对照组、试剂培养基阴性对照组。第一、二、三组菌落数接近，组间菌落误差率不超过15%，第四组无菌落生长，且试验重复3次全部达标，才可判定中和剂合格，才能用于后续分枝杆菌杀灭检测。

　　四、分枝杆菌消毒效果判定规则

　　结果以杀灭对数值KL作为核心评价指标，KL=对照组活菌对数值‑试验组活菌对数值，不同试验类型的合格阈值各不相同。

　　1.**悬液定量杀灭试验**：产品最低使用浓度下，最短作用时间、1.5倍最短作用时间，3次重复试验杀灭对数值全部≥4.00，判定消毒效果合格。

　　2.**载体浸泡定量杀灭试验**：产品规定使用浓度下，最短作用时间、1.5倍最短作用时间，全部试验杀灭对数值≥3.00，判定合格。

　　3.**物体表面模拟现场消毒试验**：产品说明书最低浓度与最短作用条件，所有样本杀灭对数值均≥3.00，判定合格。

　　同时试验需要设置阳性对照、阴性对照，阳性对照用来确认初始菌量满足标准范围；阴性对照用来排查培养基、稀释液、中和剂的污染问题，对照不满足要求时，整组试验结果无效。活菌培养采用平皿倾注法，培养基选用改良罗氏培养基或者合规商品化分枝杆菌培养基，36℃±1℃条件培养7d后读取菌落计数。

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