分枝杆菌具备较强的环境抵抗力，相较于普通细菌更难被消毒剂杀灭，是医疗机构、内镜中心、公共环境感染防控的重点管控微生物。消毒产品若宣称具备抗分枝杆菌的消毒能力，必须完成标准化的消毒效果评价检测，检测结果直接关系产品卫生安全评价备案、市场合规上市，也直接影响临床与公共场景的感染风险控制。WS/T10054‑2026《分枝杆菌消毒效果评价方法》将于2026年12月1日正式实施，替代旧版WS/T327‑2011，该新规对试验条件、检测项目、判定指标进行多处更新，是消毒剂、化学因子类消毒器械开展分枝杆菌消毒效果验证的重要行业依据。

　　一、新规适用范围及主要修订变化

　　WS/T10054‑2026适用于消毒剂以及产生化学消毒因子的消毒器械开展分枝杆菌消毒效果评价，不适用于抗菌药物药效测试。对比旧版标准，本次修订做了多项技术升级，新增基本要求章节，扩充可选用的载体材质，增加物体表面模拟现场消毒试验项目，更新改良罗氏培养基、营养肉汤等培养基的配方与制备工艺，优化术语定义与结果评价规则，让实验室检测条件更加贴合产品实际使用工况。

　　标准明确，分枝杆菌相关全部试验操作需要在BSL‑2生物安全实验室内开展，菌株、染菌载体操作必须在Ⅱ级生物安全柜内完成，试验指示菌株采用龟分枝杆菌脓肿亚种，菌种传代、废弃物处置都需要落实生物安全管理要求。

　　二、试验前置基础条件要求

　　正式开展杀灭试验前，需要完成菌株制备、载体处理、中和剂鉴定、有机干扰物配置等多项前置工作，任何环节不达标都会造成试验结果无效。

　　菌种方面，正式试验选用第5‑6代斜面培养物制备菌悬液，菌悬液需要现配现用，仅限当日使用，不可过夜保存。载体可依据实际消毒对象选择不锈钢、玻璃、棉布、滤纸、聚四氟乙烯等材质，硬质载体需要完成脱脂灭菌处理，采用滴染法制备染菌载体。

　　有机干扰物区分两种工况，较清洁消毒对象悬液试验采用0.3%牛血清白蛋白，脏污未清洗对象采用3.0%牛血清白蛋白；载体浸泡试验统一使用胰蛋白胨大豆肉汤。

　　中和剂鉴定为强制性前置试验，分为悬液定量鉴定与载体定量鉴定，载体鉴定结果不能直接套用至悬液试验。试验设置四组对照，只有三组试验菌量接近、组间菌落误差率≤15%，阴性对照组无菌生长，三次重复全部通过，中和剂才算合格，方可用于后续杀灭试验。

　　三、三大核心试验方法及适用场景

　　新规将检测分为实验室试验和模拟现场试验，企业需要结合产品剂型、使用方式匹配对应的试验方案。

　　1.悬液定量杀灭试验

　　该方法面向可稀释使用的化学消毒剂。试验设置说明书最低使用浓度，搭配0.5倍最短作用时间、最短作用时间、1.5倍最短作用时间三个时间梯度，试验温度控制20℃±1℃。接触消毒结束后加入中和剂终止反应，进行活菌倾注培养计数。悬液试验回收菌量需要控制在1×10⁶‑5×10⁶CFU/mL，整套试验重复3次。

　　2.载体浸泡定量杀灭试验

　　黏稠消毒剂、冲洗类消毒剂、原液使用消毒剂以及化学消毒因子类器械优先选用载体浸泡定量杀灭试验。染菌载体单片回收菌量需满足1×10⁶‑5×10⁶CFU/片，载体完全浸没在消毒剂中，到达设定时间取出放入中和剂试管充分振荡洗脱，再进行活菌培养计数，同样要求三次重复试验。

　　3.物体表面模拟现场消毒试验

　　作为本次标准新增项目，用于模拟物体表面真实消毒环境。在密闭空间布置不少于10片染菌载体，点位兼顾常规位置和最难消毒点位，按照产品说明书规定条件完成消毒，回收全部载体洗脱计数。针对内镜类消毒产品，则按照对应国标开展内镜模拟现场消毒试验。

　　四、新规结果判定核心规则

　　杀灭对数值KL是评价消毒效果的核心指标，不同试验类型，合格阈值存在明确差异。

　　1.**悬液定量杀灭试验**：产品最低使用浓度条件下，最短作用时间、1.5倍最短作用时间，三次全部试验杀灭对数值≥4.00，判定分枝杆菌消毒效果合格。

　　2.**载体浸泡定量杀灭试验**：产品规定使用浓度条件下，最短作用时间、1.5倍最短作用时间，全部试验杀灭对数值≥3.00，判定合格。

　　3.**物体表面模拟现场消毒试验**：按照说明书最低浓度、最短作用时间开展试验，所有样本杀灭对数值均≥3.00，判定合格。

　　试验过程必须同步设置阳性对照与阴性对照。阳性对照确认体系初始菌量符合标准范围；阴性对照排查培养基、稀释液、中和剂污染，对照不满足要求，试验结果作废。活菌培养使用改良罗氏培养基或商品化分枝杆菌培养基，36℃±1℃恒温培养7天后读取菌落结果。

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