分枝杆菌抵抗能力强，普通消毒方式难以彻底灭活，医疗机构、公共环境物体表面的分枝杆菌污染，极易造成交叉感染风险。以往分枝杆菌消毒效果仅依靠悬液、载体浸泡的实验室试验验证，和真实物体表面消毒工况存在一定差距。WS/T10054‑2026《分枝杆菌消毒效果评价方法》将于2026年12月1日实施，相比旧版标准，新增**物体表面模拟现场消毒试验**项目，填补了分枝杆菌在物体表面实际应用场景效果验证的空白，对宣称物体表面抗分枝杆菌功效的消毒剂、化学因子类消毒器械来说，是重要的效果验证手段，直接关系产品检测结果真实性与市场合规性。

　　一、新增试验的目的与适用范围

　　物体表面模拟现场消毒试验，是在密闭空间条件下，借助人工污染载体的定量杀灭模式，评估消毒剂、产生化学消毒因子的消毒器械，在物体表面工况下对分枝杆菌的实际消毒效果。

　　该试验主要针对用于环境物体表面消毒的产品，用来弥补纯实验室载体浸泡试验的局限性，模拟喷洒、熏蒸等实际使用工况。需要注意，内镜类产品不适用本项试验，内镜相关分枝杆菌模拟现场评价执行对应的专用国标要求。试验全部操作需要在BSL‑2生物安全体系下开展，落实菌株操作、转运、废弃物处置的生物安全管理要求。

　　二、试验前期准备关键要求

　　1)试验菌株与染菌载体

　　试验指示菌株为龟分枝杆菌脓肿亚种，正式试验采用第5‑6代培养物制备菌悬液，菌悬液现配现用，仅限当天使用。

　　载体材质需要匹配产品实际消毒对象，包含金属、玻璃、聚四氟乙烯、棉布、滤纸等，硬质载体需要完成脱脂灭菌，采用滴染法制备染菌载体。单片载体回收菌量控制在1×10⁶CFU/片～5×10⁶CFU/片。载体完成染菌之后，需要在无菌条件包装转运，避免菌株污染或者载体上菌量流失。

　　2)对照设置要求

　　标准明确要求试验必须设置三组对照，缺一不可。

　　1.**试验组**：不少于10片染菌载体，点位分布均匀，同时覆盖最难消毒位置；

　　2.**阳性对照组**：放置2片染菌载体，与试验组放置相同时长，不做消毒处理，用于确认载体上初始活菌量；

　　3.**阴性对照组**：用于核查稀释液、培养基是否存在污染，一旦阴性对照长菌，本次试验结果无效。

　　三、核心操作流程要点

　　1.选择符合要求的密闭空间作为模拟试验环境，在Ⅱ级生物安全柜完成染菌载体分装包装，按照生物安全规范转运至密闭空间内布点；

　　2.打开平皿，按照产品说明书规定最低使用浓度、最短作用时间开展消毒处理，布点需要兼顾常规位置以及消毒因子不易到达的难点位置；

　　3.消毒到达预设时间，全部点位的载体收集包装，密闭转运回到BSL‑2实验室生物安全柜内；

　　4.将载体放入装有中和剂的试管，通过电动混匀振荡或者手掌振打方式充分洗脱载体表面残留菌体，中和作用10min；

　　5.采用平皿倾注法接种，改良罗氏培养基或者商品化分枝杆菌培养基，36℃±1℃条件培养7d后开展菌落计数；

　　6.整套试验需要重复3次，三次试验全部达标，方可判定试验合格。

　　重要提示：中和剂需要提前完成中和剂鉴定试验，载体鉴定结果不能直接套用至悬液试验，中和剂不合格会直接造成洗脱计数结果失真。

　　四、结果判定规则

　　以杀灭对数值KL作为评判指标，物体表面模拟现场消毒试验合格条件：按照产品说明书最低使用浓度、最短作用时间开展试验，**三次重复试验中，所有样本的杀灭对数值均≥3.00，才可判定该产品物体表面分枝杆菌消毒效果合格**。

　　阳性对照组的回收菌量必须符合载体菌量范围；若阳性对照菌量不达标，本次模拟现场试验作废，需要重新开展检测。

　　中科检测是专业的消毒产品检测机构，具备CMA资质，开展消毒剂、消毒器械分枝杆菌消毒效果评价检测服务，严格按照WS/T10054‑2026新标准开展悬液定量、载体浸泡、物体表面模拟现场消毒全套试验，出具合规检测报告，助力消毒产品企业完成卫生安全评价备案工作。