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染色体畸变试验的方法
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2021-09-10 - 来源：中科检测
染色体畸变是基因突变的一种形式，通常后果比较严重。可用外周血淋巴细胞，或人和哺乳动物体细胞系作为材料进行检测，常用的体细胞系有中国地鼠卵巢细胞(CHO)，中国地鼠肺成纤维细胞(V79和CHL)，人胚肺2倍体成纤维细胞等。
一、染色体畸变试验原理
外周血中小淋巴细胞几乎都处在细胞增殖周期的G。期或G。期(不同于体外培养的体细胞)。一般条件下是不会再分裂的。当在培养物中加入适量的植物血凝素(phytohernagglu—tinin，PHA)，37℃培养52～72h后，淋巴细胞开始转化，进入细胞增殖周期，此时可获得大量的有丝分裂细胞。再经过秋水仙素处理，低渗、固定，即可在显微镜下观察到良好的中期染色体分裂象。电离辐射，化学有害物质作用于机体或体外细胞，均可引起细胞染色体的损伤，且损伤与剂量(浓度)呈良好的线性关系。
二、材料与方法
(一)染色体畸变试验材料
1．受试材料：外周血淋巴细胞。
2．RPMI 1640培养液，含20％小牛血清。
3．肝素：用生理盐水配成500U／ml，4℃冰箱内保存备用。
4．秋水仙素：用0．85％生理盐水配成40μg／ml浓度，过滤后4℃冰箱保存。
5．促细胞分裂剂：植物血凝素(PHA)。
6．KCl低渗液：配制75mmol／L KCl水溶液。
7．固定液(甲醇：冰醋酸=3：1)。
(二)染色体畸变试验方法
1．受试物的处理实验分组，至少设立五个组，即阳性对照、阴性(溶剂)对照及三个剂量组。zui高剂量和zui低剂量之间相差10倍，中间再设一个剂量，阳性对照物为已知的染色体断裂剂，如C(mitomycin c，MMC)，剂量为o．02μg／ml；黄曲霉素毒素Bl，浓度为10-6 M等。每组中应设2～3个平行样品。
2．外周血淋巴细胞培养常规培养。
3．收集细胞经受试验处理的细胞，培养开始后52～72h收集细胞。依不同受试物收集时问有所差异。
4．加入秋水仙素培养终止前4h于培养物中加入40μg／ml秋水仙素，终浓度为0．4～0.8μg／ml，37℃培养。
5．制片。
6．染色用(}iem∞染液染色15min，用自来水轻轻冲洗残留染液，待干。
7．镜检先在低倍镜下寻找分散良好的分裂象细胞，然后用高倍镜观察，进行染色体畸变计数，分析，分别记录染色体畸变细胞数及各种类型染色体畸变细胞数，选择良好的典型的染色体畸变图进行显微照相。
三、结果分析
1．染色体总畸变率及畸变率
总畸变率(％)=各种畸变类型数／分析细胞总数×100
畸变率(％)=染色体畸变数／染色体总数×100
2．畸变类型分析包括断片(F)、双着丝粒(D)、环(R)、互换(E)等，电离辐射常见断片、双着丝粒、环等，而化学毒物常见单体断裂。
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