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对真菌毒素检测的其中一种方法：酶联免疫吸附法的解读

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2021-10-21
来源：中科检测

　　上文讲述了真菌毒素检测方法中的气相色谱及其联用方法，接下来小编讲解真菌毒素检测的方法当中的另一个方法：气相色谱及其联用方法。

　　酶联免疫吸附法(ELISA）始于20世纪70年代，是一种将抗原和抗体的特异性免疫反应和酶的高效催化作用有机结合起来的真菌毒素检测技术。随着单克隆抗体技术的发展应用及免疫试剂盒的商业化，ELISA 已广泛应用于分析检测领域。

　　其基本原理是在不损坏其免疫活性的条件下把抗原或抗体预先结合到某种固相载体表面；测定时，将受检样品(含待测抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按一定程序与结合在固相载体上的抗原或抗体起反应形成抗原或抗体复合物；反应终止时，固相载体上酶标抗原或抗体被结合量(免疫复合物)即与标本中待检抗体或抗原的量成一定比例；

　　经洗涤去除反应液中其他物质，加入酶反应底物后，底物即被固相载体上的酶催化变为有色产物，最后通过定性或定量分析有色产物量即可确定样品中待测物质含量。在真菌毒素检测中应用这样一种快速、简便、特异灵敏的技术，意义尤为重大。

　　用上述法检测发现，18批中成药中黄曲霉毒素B，(AFB)的含量均小于1 ug kg-'；测定30种常用药材及7个品种20批次中成药中的黄曲霉毒素B，30种药材中黄曲霉毒素B含量最低值为5.46 ug kg-'，最高值为35.94 ug kg-'；20批中成药中黄曲霉毒素B最低为16.66 ug kg-'，最高为49.60 ug kg'；生等测定了20批中药材及2批中成药中AF的含量，AF的含量范围为О~200 ug kg-'，18批中药材AFB含量超过5 ug kg-'，2批制剂中 AFB含量分别为23.7 ug kg-'和29.5 ug kg-'。

　　采用间接竞争酶联免疫吸附法测定杏仁、酸枣仁、牵牛子、冬瓜子等种子类中药材中AFB，的含量。结果表明，所测样品均有不同程度的AFB污染，其中一批益智仁中AFB含量超过20ug kg-'。采用自制抗-OTA兔血清抗体(IgC)及鸡卵黄抗体(IgY)建立了检测OTA的ELISA方法。检测IgCG和 IgY的灵敏度分别为10ng mL-'和1 ng mL-'。

　　制备了基于玉米赤霉烯酮(Zearalenone，ZEN)-阳离子化蛋白结合物的ZEN抗体。ZEN通过曼尼西反应与阳离子化牛血清白蛋白(cBSA)配对。BALB/c(系)小鼠与ZEN-cBSA 免疫接触后，迅速诱导产生免疫反应。ZEN 多克隆抗血清和单克隆抗体的滴定度分别为30000 和20000，与5种类似物的交叉反应率分别为小于7%和小于2%。随后建立了基于ZEN单克隆抗体的间接竞争酶联免疫吸附法，用该法检测中药中ZEN的回收率为80%~120%，变异系数小于15% 。

　　构建了检测AFM的直接竞争-酶联免疫吸附（dc-ELISA)体系，将辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase，HRP)与高纯度抗AFM单克隆抗体进行偶联后对其与AFM竞争性反应条件进行优化，并利用AFM污染标准物质ERMI -BD282(O)、ERMI -BD283 (0.11 ug kg-')、ERMI -BD284(0.44 ug kg-')等对检测体系的灵敏度和精确性进行验证。检测范围为0.015~4.05 ug L-'，平均回收率为80% ，dc-ELISA可满足AFM国家残留限量标准0.5ug kg-'的检测要求。

　　以上就是小编关于真菌毒素检测的方法当中的另一个方法：气相色谱及其联用方法的归纳总结，希望对大家有所帮助。还想了解更多检测项目继续关注第三方检测机构——中科检测。（原文出处：中药中真菌毒素检测方法的最新研究进展）

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