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菌种鉴定一般采用的方法有哪些 菌种鉴定基本步骤
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  • 2023-08-08
  • 来源:中科检测

  菌种鉴定一般采用的方法有哪些?菌种鉴定一般就只要提取基因组DNA,然后PCR扩增16s rDNA片段,上机测序之后,上GeneBank或者Eztaxon对比即可。一般序列相似度在99%以上就可以认为是同一个种细菌。下面跟着中科检测小编来了解菌种鉴定基本步骤及方法。


  菌种鉴定一般采用的方法


  菌种鉴定的方法一般有常规鉴定和分子生物学方法:


  (1)常规鉴定:菌落形态观察、革兰氏染色、菌毛染色、糖类分解实验、吲哚实验、淀粉水解实验、V-P实验、甲基红实验、柠檬酸盐利用实验、硝酸盐还原实验、接触酶实验等


  (2)分子生物学方法:细菌16SrDNA菌种鉴定:提取DNA,特定引物PCR扩增,PCR产物纯化测序,进化树分析;真菌18S rDNA/ITS菌种鉴定流程也是一样的。



  菌种鉴定基本步骤


  在实验室中,主要是根据所用的鉴定仪器特点、感染性疾病的类型、标本种类、采集部位等因素建立具体的微生物学检验程序。大致步骤如下。


  1.获得被鉴定菌种的纯培养菌落。


  2.确定染色(革兰染色、抗酸染色)、形态和排列,按科、属、种依次鉴定下去。


  3.运用知识、经验、最小数量的试验方法做出鉴定。


  微生物鉴定指导原则(通则9204)


  微生物鉴定是药品微生物检验中的重要环节,药典附录相应章节中对检出微生物的鉴定做了明确规定,如“非无菌产品的微生物检查:控制菌检查”(通则1106)中选择培养基或指示培养基上发现的疑似菌落需进行鉴定。


  对“无菌检查法”(通则1101)的阳性实验结果中分离的微生物进行鉴定,以判定试验是否重试;药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则(通则9203)中建议对洁净室和其他受控环境分离到的微生物进行鉴定,以掌握环境微生物污染情况,有助于污染调查。


  此外,在药品生产中,有时亦需对药物原料、辅料、制药用水、生产环境、中间产物和终产品中检出的微生物进行适当水平的鉴定。


  中科检测是国科控股旗下第三方检测机构,开展菌种鉴定服务,菌种鉴定手段包括形态学观察、生理生化特性鉴定、 BIOLOG碳源自动分析鉴定、分子生物学鉴定、API细菌数值鉴定、功能性分析及功能基因、RAPD、SSCP、TLC薄层层析等。


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