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细胞划痕实验原理及试验详细步骤
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  • 2024-06-26
  • 来源:中科检测

细胞划痕实验(Wound Healing)是一种操作简单,经济实惠的研究细胞迁移/肿瘤侵袭的体外试验方法。这种方法的原理是,当细胞长到融合成单层状态时,在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域,称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。以此来观察测量细胞的迁移侵袭能力。在化妆品修复功效评价中,细胞划痕实验可以模拟皮肤受损后的自然愈合过程,用于观察化妆品等外源因素对细胞迁移、修复和相互作用的影响。

中科检测可开展细胞划痕实验,评估化妆品成分或产品对促进皮肤修复和愈合效果,出具的化妆品修复功效评价报告具有CMA资质。

 

实验原理

细胞划痕实验是通过在细胞单层上划痕并通过延时显微镜定期捕获图像,从而研究细胞迁移运动、修复能力和细胞间相互作用的实验室技术,基本原理是:在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域,称为“划痕/伤口”,划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕/伤口”愈合,于细胞迁移过程中在开始和定期捕获图像,通过测量不同时间点的划痕间距并计算差值,可对细胞的迁移能力做出判断。

 

实验步骤

1、准备


所有能灭菌的器械都要灭菌,包括直尺(或者24孔板盖)和marker笔在操作前紫外照射30min(超净台内)。


2、流程


1)铺板:将细胞完全消化后加入完全培养基终止消化,彻底将细胞吹打均匀,然后按比例铺板。如果不均匀可以用手掌对着一横边和一纵边轻轻拍打,切忌四个边都拍打,这样细胞很容易聚到中间。


2)掌握细胞状态,过夜能长满为佳。


3)第二天用黄枪头比着直尺(或者枪头,板盖),垂直在原来的培养基里划痕,每孔1道(也可多划几道,参考细胞状态),枪头要垂直,不能倾斜。


4)用PBS清洗细胞1-2次,去除划下的细胞,加入低血清培养基(或者完全培养基);然后去显微镜下拍照,尽量高倍镜低倍镜都拍照,可以事先在板子底部用Marker笔画上小圆圈标记来保证能拍到同一个点,作好记录。


5)加药,放入37度5%CO2培养箱,培养时间依照实验要求进行,通常以12h、24h、48h为准。按所需时间节点安排取样拍照时间。