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2024-06-24 - 来源：中科检测
传染病和细菌性感染对全球公共卫生构成了重大威胁，它们已经位列全球主要致死原因的前茅。面对这一挑战，开发创新且高效的抗菌策略显得尤为紧迫。为了验证抗菌剂的杀菌能力，需要进行一系列体外抗菌实验。
一、孔径抑菌法
孔径抑菌法是一种简便而广泛的体外抗菌测试方法。其基本理念是将待测试的抗菌物质溶解于培养基中，然后在琼脂平板上创建不同直径的孔洞，并将溶液滴入这些孔洞。通过观察孔洞周围细菌的生长情况，可以判断待测物质是否具有抑菌效果。如果存在抑菌作用，孔洞周围将形成无菌区域。
操作步骤包括：
1.准备琼脂平板和待测物质的溶液。
2.在平板上制作不同直径的孔洞。
3.将溶液滴入孔洞。
4.培养一段时间后，观察孔洞周围的生长情况。
二、最小抑菌浓度法（MIC）
最小抑菌浓度法是一种定量评估抗菌物质抑制细菌生长能力的实验方法。通过在一系列不同浓度的溶液中接种细菌，可以确定最低有效浓度，从而评估抗菌活性。
操作步骤包括：
1.准备一系列浓度递增的待测物质溶液。
2.在试管中加入待测物质溶液和细菌悬液。
3.培养一段时间后，观察细菌的生长情况。
4.根据最低有效浓度来评估抗菌物质的抗菌活性。
三、平板计数法
抗菌剂对细菌进行杀菌处理以后，将细菌稀释到合适的倍数进行平板涂布并对长出的菌落进行计数。通过计算细菌存活率或者致死率来表征抗菌剂抗菌效果。
四、活死染色法
活死染色法是一种常用的评估抗菌效果的方法。处理后的细菌通过特定的染色剂进行染色，以区分活细胞和死细胞。
目前有许多品牌的细菌活死染色试剂盒，以SYTO-9和PI为例:
SYTO-9：一种荧光核酸染料，可用于染色RNA和DNA，包括真核细胞和革兰氏阳性/阴性细菌。
PI：一种细胞核染色剂，对DNA染色并在嵌入双链DNA后释放红色荧光，主要标记凋亡晚期和死细胞。
五、清除生物膜法
随着对生物膜在慢性和顽固性疾病中作用的认识加深，评价抗菌剂对生物膜的抑制效果变得至关重要。生物膜中的细菌对传统杀菌剂和宿主免疫具有高度抗性。
评估方法包括：
1.结晶紫染色：观察生物膜的剩余面积或测定其吸光度（OD值）。
2.荧光共聚焦成像：直观显示抗菌剂对生物膜的影响。
这些方法为抗菌剂的研究和开发提供了重要的实验基础，有助于发现和验证新型抗菌策略。
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